Flúrljómun er eðlisfræðileg áhrif sem stafa af losun ljósorku þegar efni er lýst upp með ljósi eða annars konar rafsegulgeislun. Flúrljómunarsmásjá er sjónsmásjá sem notar flúrljómun og fosfórljómun á staðnum eða ásamt speglun og frásog til að rannsaka sjónfræðilega eiginleika lífrænna og ólífrænna hluta. Flúrljómunarsmásjárfræði hjálpar til við að sjá undirfrumu og innri uppbyggingu hluta betur. Það var uppgötvað snemma á 20. öld af August Köhler, Carl Reichert og Heinrich Lehmann.
Greinaskrá (smelltu til að hoppa)
Hvernigflúrljómunarsmásjárskoðunvirkar
Flúrljómunarsmásjá vinnur
Íhlutir flúrljómunar smásjár
1. Flúorófór
2. Ljósgjafi
3. Örvunarsía
4.Dichroic spegill
5. Losunarsía
Kostir flúrljómunarsmásjár
Ókostir flúrljómunarsmásjár
Notkun flúrljómunarsmásjár
Hvernig flúrljómunarsmásjárskoðun virkar
Flúrljómunarsmásjárskoðun virkar venjulega með því að lita samsetningu og uppbyggingu sýnis með litarefnum. Þetta er vegna þess að flestir frumuhlutar eru litlausir í eðli sínu. Þess vegna er ekki auðvelt að greina þau frá hvor öðrum. Flúorófórar eða flúrljómandi sameindir upplýstar með stuttri bylgjulengd ljóss eða rafsegulgeislum hafa tilhneigingu til að gefa frá sér ljós. Ljósið sem gefur frá sér hefur lengri bylgjulengd miðað við innfallsljósið. Venjulega er tímalengd milli geislunar og losunar mæld í nanósekúndum og auðvelt er að hunsa hana. Ljósið sem gefur frá sér er aðskilið frá innfallsljósinu, sem segir til um nákvæma staðsetningu flúorfórsins. Myndin af sýninu er mynduð út frá aukaljósi frekar en aðal innfallsljósi.
Flúrljómunarsmásjá vinnur
Flúrljóssmásjá virkar á svipaðan hátt og ljóssmásjá. Það samanstendur af sterkum ljósgjafa, sérstakri bandpass síu og flúrljómandi merki sýnisins. Sýnið sem á að rannsaka er sett undir smásjá. Ljós með bylgjulengd sem er nógu stutt til að örva flúorfórinn er upplýst á sýninu. Með hjálp hlutlinsu er þetta ljós beint að sýninu. Örvunargeislarnir sem sýnið gefur frá sér eru síðan fókusaðir á skynjarann í gegnum hlutlinsuna. Meginhluti örvunarljóssins berst í gegnum sýnishornið en hluti þess endurkastast til baka og nær skynjaranum.
Íhlutir flúrljómunar smásjár
1. Flúorófór
Flúorófór er efnasamband sem gefur frá sér ljós þegar það er örvað af rafsegulbylgjum eða ljósbylgjum. Það er einnig kallað flúrljómandi litarefni. Flúorófórar samanstanda í grundvallaratriðum af blöndu af arómatískum hópum eða planum/hringlaga sameindum með ýmsum π tengi.
2. Ljósgjafi
Ljósgjafinn er einn mikilvægasti hluti flúrljómunar smásjár. Hér eru algengustu ljósgjafarnir sem notaðir eru til örvunar leysir, aflstór LED, xenon boga lampar, kvikasilfursgufu lampar osfrv.
3. Örvunarsía
Örvunarsíur sem notaðar eru í flúrljómunarsmásjá eru venjulega bandpasssíur, sem leyfa merki sem falla innan ákveðinnar bandbreiddar á meðan þau hafna öllum öðrum merkjum. Bylgjulengdirnar sem flúorfórinn gleypir fara auðveldlega framhjá á meðan endurkasta sjóngeislunin er lokuð.
4.Dichroic spegill
Tvílíkir speglar virka sem þunnfilmusíur. Megintilgangur tvíhyrningsspegils er að senda ljós úr litlum litasviði valkvætt en endurspegla alla aðra liti. Það er einnig þekkt sem nákvæm litasía.
5. Losunarsía
Losunarsían er bandpass sía. Losunarsíur virka svipað og örvunarsíur. Það geislar frá sér ljós sem flúorófór gefur frá sér á meðan það hindrar örvunarljósið.
Kostir flúrljómunarsmásjár
1. Næmni flúrljómunarsmásjár er mjög mikil, jafngildir um það bil 50 sameindum á rúmmetra.
2. Með flúrljómunarsmásjá er hægt að lita mismunandi sameindir í mismunandi litum, sem gerir notendum kleift að mynda margar sameindir efnis á sama tíma.
3. Flúrljómunarsmásjár eru skilvirkari en hefðbundnar ljóssmásjár.
4. Hægt að nota fyrir in vivo og in vitro myndgreiningu.
5. Flúrljómunarsmásjárskoðun getur aðskilið einstök prótein með mikilli nákvæmni.
6. Flúrljómunarsmásjárskoðun hentar best til að mynda og rannsaka kraftmikla hegðun sem lifandi frumur sýna.
7. Flúrljómunarsmásjárskoðun er fær um að framleiða háupplausnar og skýrar myndir og efla þar með rannsóknir.
8. Það sameinar stækkunareiginleika ljóssmásjárskoðunar við sjónræna flúrljómun.
9. Hægt er að nota flúrljómunarsmásjá til að búa til þrívíddar stækkaðar myndir af sýninu sem verið er að rannsaka.
Ókostir flúrljómunarsmásjár
1. Flúrljómandi efnasambönd eða flúorfór sem eru til staðar í flúrljómunarsmásjárskoðun hafa tilhneigingu til að missa getu sína til að gefa frá sér ljós með tímanum þegar þau eru spennt vegna ferlis sem kallast ljósbleiking. Ljósbleiking á sér stað venjulega þegar flúorófór sameind er efnafræðilega skemmd vegna rafrænnar örvunar við flúrljómun.
2. Það leyfir aðeins athugun og rannsókn á ákveðnum mannvirkjum í sýninu sem hafa verið auðkennd og merkt sem flúrljómandi.
3. Þegar flúrljómandi efni eru geislað af ljósi mynda flúrljómandi sameindir oft efni, sem leiðir enn frekar til ljóseiturhrifa. Þessi ljóseiturhrif eyðileggja upprunalega eiginleika sýnisins sem sést. Ljóseiturhrif skammbylgjulengdar ljósgeislunar eru tiltölulega mikil.
4. Flúrljómunarsmásjárskoðun getur ekki gefið upplýsingar um lípíð tvílagið, sérstaklega fyrir jeppa.
5. Flúrljómunarsmásjárskoðun getur ekki gefið neinar óyggjandi athuganir sem tengjast tvílags eðli eða lamellarity blöðranna.
6. Viðbót á rannsaka og litarefnum truflar oft eiginleika lípíðblaðra, sem leiðir til ónákvæmrar túlkunar gagna og eyðileggur þar með áreiðanleika tilraunarinnar.
7. Lípíðperoxun af völdum ljóss getur leitt til lénsmyndunar.
Notkun flúrljómunarsmásjár
1. Flúrljómunarsmásjárskoðun er mikið notuð til að rannsaka innri uppbyggingu sýna á smásjástigi með hæsta gæðaflokki.
2. Flúrljóssmásjá hentar best til að rannsaka lifandi lífsýni.
3. Þessi tegund af smásjá er oft ákjósanleg þegar merkt er innstu uppbyggingu frumna eða örvera.
4. Hjálpar til við að mæla lífeðlisfræðilegt ástand frumna eða sýna sem fylgst er með.
